Cân nhắc lựa chọn Kháng Thể phù hợp Ứng Dụng của bạn

Bước 1: ứng dụng

Mục tiêu thí nghiệm của bạn là gì? Bạn muốn quan sát vị trí protein hay bạn quan tâm hơn đến mẫu nào biểu hiện protein của bạn? Trả lời điều này có thể giúp bạn quyết định kỹ thuật nào phù hợp nhất.

IHC = immunohistochemistry (Hóa Mô Miễn Dịch), ICC = immunocytochemistry (Hóa Miễn Dịch Tế Bào), FACS = fluorescence-activated cell sorting (Phân Loại Tế Bào Kích Hoạt Huỳnh Quang)

Bước 2: kháng thể sơ cấp

Dựa trên ứng dụng đã xác định, tiếp theo bạn cần quan tâm đến loại kháng thể sơ cấp.

Đơn dòng vs Đa dòng

Xác nhận giá trị sử dụng

Việc tự tin rằng kháng thể mà bạn lựa chọn liên kết với mục tiêu là rất quan trọng đối với một nghiên cứu có giá trị và có tính tái lập. Việc xác nhận giá trị sử dụng của một kháng thể cung cấp bằng chứng cho thấy kháng thể nhận diện được mục tiêu chuyên biệt và hoạt động cho một ứng dụng nhất định.

Khi bắt đầu thiết kế thí nghiệm cùng với kháng thể, cũng cần quen thuộc với các yêu cầu xác nhận giá trị sử dụng của từng phương pháp:

+Phân tích tế bào dòng chảy: Hiệu suất kháng thể có thể khác nhau khi tương tác với các tế bào sống, tế bào chết hoặc tế bào đã được cố định hoặc thay đổi tính thấm. Màng tế bào nguyên vẹn có thể ngăn cản kháng thể tiếp cận các mục tiêu nội bào.

+Western blot: Tất cả dữ liệu xác nhận giá trị sử dụng Western blot phải bao gồm các marker kích thước và các đối chứng dương tính/âm tính. Ngoài ra, để xác nhận phản ứng kháng thể, các chất ly giải từ các tế bào mà biểu hiện quá mức protein mục tiêu, chẳng hạn như các hệ thống không thuộc tế bào, các dòng tế bào ổn định hoặc được chuyển gen tạm thời, thường được sử dụng. Tuy nhiên, việc phát hiện các protein tự nhiên trong tế bào hoặc mô có thể mang lại giá trị lớn hơn trong việc đánh giá hiệu suất kháng thể.

+ELISA: Đối với các phương pháp ELISA sử dụng cặp kháng thể, chẳng hạn như để bắt giữ và phát hiện, tốt nhất là xác nhận giá trị sử dụng với cặp kháng thể để đảm bảo kết quả chính xác. Một cách khác nữa là kiểm tra các tài liệu tham khảo do bộ kit ELISA cung cấp, chẳng hạn như quy trình, có thể chỉ ra các điều kiện thử nghiệm tối ưu để đảm bảo độ tái lập.

+Miễn dịch huỳnh quang: Trong các ứng dụng miễn dịch huỳnh quang, bao gồm IHC, hiệu suất kháng thể phụ thuộc vào bản chất và trạng thái của mẫu tế bào hoặc mô. Điều quan trọng là phải quan sát phát hiện mục tiêu, tính đặc hiệu và khả năng định vị bằng cách sử dụng các loại tế bào và mô thích hợp với mức độ biểu hiện mục tiêu đã biết. Các điều kiện thử nghiệm của quá trình xác nhận, chẳng hạn như bản chất mô cố định, cũng nên được xem xét.

Bước 3: kháng thể sơ cấp

Loại kháng thể thứ cấp mà bạn sử dụng thường phụ thuộc vào ứng dụng của bạn. Dưới đây là một số kháng thể thứ cấp được đề xuất cho các ứng dụng nhuộm miễn dịch thông dụng:

IHC = immunohistochemistry (Hóa mô miễn dich), ICC = immunocytochemistry (Hóa miễn dịch tế bào), FACS = fluorescence-activated cell sorting (Phân Loại Tế Bào Kích Hoạt Huỳnh Quang), HRP = horseradish peroxidase, AP = alkaline phosphatase, IP = immunoprecipitation (Kết tủa miễn dịch)

Hãy nhớ rằng

· Chọn các chất phát huỳnh quang tốt nhất để gắn nhãn protein có biểu hiện thấp nhất của bạn

· Tất cả các kháng thể thứ cấp phải từ cùng một loài vật chủ để có thể gắn nhãn nhiều lần

· Sử dụng huyết thanh để khóa phản ứng từ cùng một loài vật chủ của sẽ làm giảm đáng kể nền.

· Các kháng thể thứ cấp được hấp phụ trước có ích cho phân tích nhiều màu để đảm bảo phản ứng chéo loài thấp

· Các kháng thể dạng mảnh nhỏ hơn và thâm nhập vào mô hiệu quả hơn (phù hợp cho IHC)

· Các hợp chất biotin cải thiện khả năng khuếch đại tín hiệu

· Lựa chọn một thương hiệu, nhà cung cấp kháng thể đáng tin cậy, với đầy đủ các thông tin bạn cần trong phần Thông tin sản phẩm: Quy trình, Thử nghiệm kiểm soát chất lượng, khuyến cáo sử dụng, tài liệu tham khảo…

Abcam Limited là nhà sản xuất, phân phối các công cụ nghiên cứu protein hoạt động trên toàn thế giới. Với hơn 10,000 kháng thể, linh hoạt cho nhiều ứng dụng khác nhau, Abcam đáp ứng nhu cầu đa dạng và yêu cầu về chất lượng kháng thể của khách hàng.